產(chǎn)品介紹
為重組 E. coli 菌株,其基因組中含有來源于 Thermusaquaticus YTI 中克隆的 Taq DNA polymerase 基因。本產(chǎn)品是一種熱穩(wěn)定性酶,分子量大約為 94kDa。它與天然 Tag DNA 聚合酶有相同的功能。在 Mg 2+存在的條件下可催化核苷酸沿 5’→3’方向發(fā)生聚合反應(yīng),形成雙鏈 DNA;同時它還具有 5’ →3’外切酶活性。
使用本品擴增得到的 PCR 產(chǎn)物的 3´端附有一個"A"堿基,因此可直接克隆于 T-Vector 中。
活性定義:在 74℃條件下,30 分鐘內(nèi)催化 10nmol 的 dNTP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為一個活性單位。
貯存條件: 20 mM Tris-HC(l pH 8.0,25℃),100 mM KCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,0.5% NP-40 ,0.5% Tween -20 ,50%Glycerol
反應(yīng)條件: 50mM KCl, 10 mM Tris-HCl (Ph8.6,25℃), 0.1% Triton X-100 ,1.5mM MgCl2.
質(zhì)量保證:本品經(jīng) PCR 驗證,活性測定,內(nèi)切核酸酶/缺刻酶測定和 SDS-PAGE 純度鑒定。保證產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
使用注意:除了酶活性喪失外,下列因素也可能導(dǎo)致擴增失敗
(1)模板太多或太少;(2)樣品中存在 Mg 2+ 絡(luò)合劑,導(dǎo)致 Mg 2+實際濃度過低;(3) PCR 儀溫度不準; (4) 臨床來源的樣品中含有未知的 Taq 酶抑制劑; (5) 引物部分降解;(6) dNTP 部分降解;(7) Taq 酶用量太大等。
建議:每 50 微升反應(yīng)體系中,酶用量為 0.5-1 微升最好,酶量少可能擴增效率低下,使用時請注意!
用途:
1) 常規(guī) PCR 鑒定。
2) 小片段目標基因克?。ㄍ扑]小于 500bp)。
3) 標記 DNA 3’-末端。
4) 平端 PCR 產(chǎn)物加“A”。