產(chǎn)品介紹
一. 制備 Dil染色液
a.制備 DMF、DMSO 或乙醇儲(chǔ)備溶液:儲(chǔ)備溶液應(yīng)在二甲基甲酰胺 (DMF)、二甲基亞砜 (DMSO 或乙醇 DMSO 中配制,濃度為 1-5 mM。溶劑DMF 優(yōu)于乙醇。儲(chǔ)備溶液分裝冷凍至少 -20℃。不能反復(fù)凍融,盡量一個(gè)月內(nèi)用完。
b. 制備工作溶液:將儲(chǔ)備溶液稀釋到合適的緩沖液如無(wú)血清培養(yǎng)基、HBSS 或 PBS 配制成 1 至 5 μM 的工作液。工作液需要現(xiàn)配現(xiàn)用。
二.染色
1) 懸浮細(xì)胞
a. 細(xì)胞懸液1000g 4℃離心3-5分鐘,棄上清,PBS洗2次,每次5分鐘。細(xì)胞密度為1×106/mL。
b. 加入1 mL Dil工作液,室溫孵育5-30分鐘。
c. 4℃,400g離心3-4分鐘,棄上清。用PBS洗滌2次,每次5分鐘。
d. 用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基或PBS重懸細(xì)胞,熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)觀察。
2)貼壁細(xì)胞
a.在無(wú)菌蓋玻片上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。
b.從培養(yǎng)基上取下蓋玻片并吸出多余的培養(yǎng)基。
c.加入100 μL工作液,輕搖使之完全覆蓋細(xì)胞,室溫孵育5-30分鐘。
d.用培養(yǎng)基洗兩次,每次5分鐘。通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀觀察。
此方法為熒光染色常用方案,僅供參考。