產品介紹
原液制備
1. 蛋白準備
為了獲得最佳標記效果，請將蛋白 (抗體)必須在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 和銨離子的pH8.5緩沖液中溶解，濃度配制為 2 mg/mL。若 pH 低于 8.0，則用 1 M 碳酸氫鈉進行調整。蛋白濃度低于 2 mg/mL，標記效率會大大降低，為了獲得最佳標記效率，建議最終蛋白質濃度范圍為 2-10 mg/mL。
2. 染料準備
將無水 DMSO 稀釋 CY 染料，制成 10 mM 儲備溶液。通過玻璃管或旋渦充分混合。CY 儲存液建議分裝后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存，不能反復凍融。（熒光染料溶液穩(wěn)定性比較差，建議最好現(xiàn)配現(xiàn)用，或者配制少量儲備液）
3. 染料工作液用量計算
標記反應所需的 CY 染料用量取決于要標記蛋白的用量，CY 染料與蛋白的最佳摩爾比為 10 左右。
例：假如所需標記蛋白為 500 μL 2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000),用 100 μL DMSO 溶解一管 1 mg CY5 染料，則所需 CY5 體積為 3.48 μL，詳細計算流程如下 (以 CY5 為例) ：
1) mmol (IgG) = mg/mL (IgG) ×mL (IgG) / MW (IgG) =2 mg/mL×0.5 mL / 150,000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol
2) mmol (CY5 ) = mmol (IgG) ×10 =6.7×10-6 mmol×10 = 6.7×10-5 mmol
3) μL (CY5 ) = mmol (CY5 ) ×MW (CY5 ) / mg/μL (CY5 ) = 6.7×10-5 mmol× 519.12 mg/mmol / 0.01 mg/μL =3.48 μL (CY5)
使用方法
1. 標記反應
1) 取算好體積的新鮮配制的 10 mg/mL CY 染料緩慢加入到 蛋白樣品溶液中，輕輕搖勻混合，然后短暫離心將樣品收集在反應管底部。切忌劇烈混勻，防止蛋白樣品變性失活。
2) 將該反應小管置于避光處，在室溫條件下輕輕搖晃孵育 60 分鐘，每隔 10–15 分鐘，將反應小管輕輕顛倒幾次，以充分混合兩種反應物，提高標記效率。
上海工商
危險品化學品經營許可證（不帶存儲）
營業(yè)執(zhí)照(三證合一)
北京