產(chǎn)品介紹

基 因 型F- mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5λ-leu mtl-1 endA1+簡 要 說 明Stbl3菌株來源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株?；蚪M含有重組酶recA13突變，可有效抑制長片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)務(wù)必使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有鏈霉素抗性，不存在lacIqZΔM15，不可用于藍(lán)、白斑篩選。High5TM系列Stbl3感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19檢測轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg DNA。操 作 說 明1.Stbl3感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。3.向離心管中加入0.9 mL 室溫 S.O.C. 培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基（推薦使用SOC培養(yǎng)基，可提高轉(zhuǎn)化效率）。 4.30℃，225 rpm復(fù)蘇90分鐘。 （當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時(shí)， 30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率，若轉(zhuǎn)化control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃， 225 rpm復(fù)蘇60分鐘。）5.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的S.O.C. 培養(yǎng)基上。6.將平板倒置放于30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。（若轉(zhuǎn)化control PUC19 計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37℃培養(yǎng)過夜）注 意 事 項(xiàng)1.對不穩(wěn)定DNA片段的克隆或逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體的構(gòu)建，涂板后平板應(yīng)在30℃培養(yǎng)，以減少發(fā)生錯(cuò)誤重組的概率。2.制備高純度病毒質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)使用新鮮轉(zhuǎn)化的平板接菌，新鮮菌液提取質(zhì)粒，菌液不可低溫保存后使用。3.對不穩(wěn)定的克隆或病毒質(zhì)粒優(yōu)先以質(zhì)粒狀態(tài)保存，盡量避免將質(zhì)粒保存在大腸桿菌細(xì)胞中。4.S.O.C.或LB培養(yǎng)基均可使用，S.O.C.可提高轉(zhuǎn)化效率20%；實(shí)驗(yàn)人員可選擇在37℃或30℃培養(yǎng)細(xì)胞，37℃條件下，菌生長速度加快，有利于提高質(zhì)粒產(chǎn)量，30℃培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組概率。5.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率?；烊肽康腄NA時(shí)應(yīng)輕柔操作。6.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

此產(chǎn)品需要干冰運(yùn)輸發(fā)貨，會根據(jù)路途及包裝大小收取一定的干冰運(yùn)費(fèi)。