產(chǎn)品介紹

基 因 型E.coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)簡 要 說 明的 ArcticExpress (DE3) pRARE2來源于ArcticExpress (DE3)，將具有氯霉素抗性的pRARE2質(zhì)粒導(dǎo)入ArcticExpress (DE3)細(xì)胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū)，使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，廣泛用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株具有四環(huán)素，慶大霉素，氯霉素抗性，endA1突變有利于質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表達(dá)適應(yīng)低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60（來自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現(xiàn)出較高活性，在ArcticExpress(DE3) pRARE2細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，可降低重組蛋白包涵體的形成，增加可溶重組蛋白的表達(dá)量及生物活性，比傳統(tǒng)的原核表達(dá)伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更加優(yōu)異的促融能力。同時(shí)，pRARE2質(zhì)?？裳a(bǔ)充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對(duì)應(yīng)的tRNA，提高外源基因的表達(dá)水平。生物生產(chǎn)的ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)108cfu/μg DNA。 操 作 說 明1. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒，并用手撥打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上（（平板中務(wù)必同時(shí)含有34ug/ml的氯霉素，40ug/ml的慶大霉素和轉(zhuǎn)化質(zhì)粒本身的篩選抗生素；若質(zhì)粒濃度較高，也可稀釋后涂板，務(wù)必保證能在平板上挑到單克隆菌落）。5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。注 意 事 項(xiàng)1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。2. ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株攜帶 pRARE2質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素、40ug/ml的慶大霉素，以防質(zhì)粒丟失。3. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。4. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細(xì)胞具有四環(huán)素、慶大霉素、氯霉素抗性，不可用于具有四環(huán)素、慶大霉素、氯霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

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