產(chǎn)品介紹

基 因 型Agrobacterium rhizogenes(strR )  MSU440 Ri (agropine type)簡 要 說 明發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個別裸子植物。MSU440發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，茶樹，青蒿等），同時具有鏈霉素抗性。生物開發(fā)的 MSU440發(fā)根農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒 (size:11633 bp)檢測轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μgDNA；經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒（size:40 kd）檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×103 cfu/μg DNA。操 作 說 明1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（體積不大于6ul，最好用試劑盒抽提，雙蒸水溶解；轉(zhuǎn)化效率較高，第一次使用前最好做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，蓋上杯蓋，空管保留待用。3. 啟動電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動電擊，電擊完成快速插入冰中，加入1 ml無抗生素的TY，并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)72小時注 意 事 項(xiàng)1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或最終用于涂板的菌量。4. MSU440具有鏈霉素抗性，不可用于具有鏈霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

此產(chǎn)品需要干冰運(yùn)輸發(fā)貨，會根據(jù)路途及包裝大小收取一定的干冰運(yùn)費(fèi)。