| 產(chǎn)品描述： | PF-5274857是一種有效的，選擇性Smoothened(Smo)拮抗劑，抑制Hedgehog (Hh)信號通路，IC50和Ki分別為5.8 nM和4.6 nM，可以穿透血腦屏障 |
| 靶點： |
Smoothened:4.6 nM(Ki) Smoothened:5.8 nM;Smo |
| 體外研究： |
PF-5274857的Ki為4.6 nM. PF-5274857可以完全抑制 Shh誘導(dǎo)的Hh通路活性，通過在MEF細胞中測量Smo下游基因 Gli1 的轉(zhuǎn)錄活性可知IC50為2.7nM。PF-5274857可以結(jié)合 Smo，IC50 為 5.8 nM. PF-5274857對μ-阿片受體可以微弱抑制，在隨后的一項功能分析中測得解離常數(shù)為36μM |
| 體內(nèi)研究： |
PF-5274857具有明顯的腫瘤生長抑制作用，這用抑制具有劑量依賴特性并能在高劑量(≥10 mg/kg)治療6天后誘導(dǎo)腫瘤退化。在腫瘤組織中PF-5274857不同程度地下調(diào)Gli1, Gli2, Ptch1和 Ptch2基因的表達水平，用藥后6到12小時達到最好效果，然而PF-5274857 對Smo表達水平?jīng)]有影響。在皮膚組織中，PF-5274857在相似的時間進程中下調(diào)Gli1和Gli2表達。在Ptch+/?p53+/?髓母細胞瘤同種異體移植小鼠模型中得到的PF-5274857對腫瘤Gli1 mRNA生產(chǎn)率抑制的IC50為 8.9 nM ，相當于血漿中藥物在這一濃度下處理6天后腫瘤生長抑制達到119%。在Ptch+/?p53?/? 髓母細胞瘤同種異體移植小鼠模型中IC50值預(yù)計為 3.5 nM, 與Ptch+/?p53+/?模型結(jié)果一致 |
| 細胞實驗： |
Cell lines: Gli-Luc/MEF 細胞 Concentrations: 50 pM- 3 μM Incubation Time: 48 小時 Method: Gli-Luc/MEF細胞培養(yǎng)在含有10%熱失活FBS, 2mM l-glutamine和0.55 mM β-mercaptoethanol 的DMEM培養(yǎng)基中直到90%細胞密度。第一天, 胰酶消化后的細胞按每孔7,500個接種在白色384孔板中，每孔加入20 μL含有1% 熱失活FBS和1 mM 丙酮酸鈉的OptiMEM 培養(yǎng)基。平板在37°C和5% CO2環(huán)境中培養(yǎng)過夜。第2天, 加入3 μM到50pM的PF-5274857 ，按照3倍連續(xù)稀釋，然后加入重組鼠源Sonic Hedgehog，終濃度2μg/mL。在37°C，5% CO2條件下細胞與PF-5274857和Shh孵育48小時。第四天利用Bright-Glo 熒光素酶分析系統(tǒng)進行熒光素酶分析。簡言之, 每孔培養(yǎng)基中加入25 μL Bright-Glo熒光素酶試劑。室溫孵育5分鐘然后酶標儀檢測數(shù)據(jù)然后計算PF-5274857的IC50值 |
| 動物實驗： |
Animal Models: 攜帶原發(fā)性Ptch+/?p53+/?或Ptch+/?p53?/?髓母細胞瘤腫瘤的 SCID-beige 小鼠 Dosages: 0 mg/kg, 1 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg和30 mg/kg Administration: 口服 |
| 參考文獻： |
1. Rohner A, et al. Effective targeting of Hedgehog signaling in a medulloblastoma model with PF-5274857, a potent and selective Smoothened antagonist that penetrates the blood-brain barrier. Mol Cancer Ther. 2012, 11(1), 57-65. |
| 溶解性： |
Soluble in DMSO、H2O |
| 保存條件： |
-20℃ |
| 配置溶液濃度參考： |
|
1mg |
5mg |
10mg |
| 1 mM |
2.289 ml |
11.443 ml |
22.885 ml |
| 5 mM |
0.458 ml |
2.289 ml |
4.577 ml |
| 10 mM |
0.229 ml |
1.144 ml |
2.289 ml |
| 50 mM |
0.046 ml |
0.229 ml |
0.458 ml |
|
| 注意： |
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