| 產(chǎn)品描述： | GW4869 (GW69A, GW554869A) 是中性Smase(鞘磷脂酶)的非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，IC50為1 μM。它對(duì)N-SMase具有選擇性，在濃度高達(dá)150 μM時(shí)對(duì)酸性SMase沒(méi)有抑制作用，它也是一種常見的外泌體抑制劑 |
| 靶點(diǎn)： |
SMase(Cell-free assay)：1 μM;Phospholipase |
| 體外研究： |
GW4869在體外細(xì)胞模型中抑制N-SMase。GW4869并不顯著地破壞TNF誘導(dǎo)的NF-κB易位入核，因此，GW4869不干涉TNF介導(dǎo)的其他關(guān)鍵信號(hào)作用。通過(guò)檢測(cè)核濃染、caspase激活、PARP的降解以及臺(tái)盼藍(lán)吸收發(fā)現(xiàn)，GW4869能以濃度依賴方式保護(hù)細(xì)胞免于死亡，同時(shí)顯著抑制細(xì)胞色素C從線粒體中的釋放以及caspase9的激活，因此N-SMase的激活應(yīng)位于線粒體線粒體功能障礙的上游。在濃度高達(dá)150 μM時(shí)，GW4869對(duì)克隆的人源A-SMase沒(méi)有抑制作用，對(duì)其他水解酶如細(xì)菌磷脂酰膽堿-PLC和牛源PP2A沒(méi)有或僅具有微弱抑制活性，而相對(duì)于人源lyso-PAF PLC，對(duì)大鼠大腦中此酶的活性更為顯著 |
| 體內(nèi)研究： |
全身用藥（GW4869）并不改變肝臟、心臟或骨骼肌中神經(jīng)酰胺或鞘磷脂的含量，但減少了腦中神經(jīng)酰胺的含量、增加了鞘磷脂含量。通過(guò)GW4869抑制nSMase2可延緩學(xué)習(xí)，在給小鼠使用GW4869后，沒(méi)有減少其在反復(fù)訓(xùn)練后找到隱蔽平臺(tái)的延遲，說(shuō)明它們對(duì)應(yīng)用空間線索進(jìn)行導(dǎo)航的學(xué)習(xí)障礙[2]。對(duì)小鼠腹腔注射以GW4869會(huì)減少其腦部和血清中外來(lái)體、腦部神經(jīng)酰胺以及Aβ1-42斑塊負(fù)荷的水平。GW4869在體內(nèi)通過(guò)阻止外來(lái)體分泌減少淀粉樣斑塊形成，在達(dá)到抑制nSMase2引起的生理效應(yīng)的濃度（即有效濃度）下，GW4869具有較少毒性 |
| 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)： |
Cell lines: MCF7細(xì)胞 Concentrations: 10-20 μM Incubation Time: 30 min Method: 將MCF7細(xì)胞培養(yǎng)在含10%FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中。將細(xì)胞以1.7 × 106個(gè)/10-cm培養(yǎng)皿的密度接種，每皿具有10 ml完全培養(yǎng)基。24小時(shí)后，將培養(yǎng)基更換為7 ml 含2%FBS和25 mM Hepes（pH 7.5）的RPMI 1640培養(yǎng)基，在處理前，讓細(xì)胞靜置2小時(shí)。將GW6849用Me2SO配制成1.5 mM懸浮儲(chǔ)存液，儲(chǔ)存于-80℃。在使用前，加入5% MSA到50 μL GW4869儲(chǔ)存懸浮液中進(jìn)行溶解，此時(shí)，GW4869的濃度為1.43 mM。將懸浮液充分混合，并置于37℃加熱，直至澄清。然后將抑制劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，處理30分鐘。然后處理以TNF。對(duì)照組處理以含5% MSA的Me2SO，濃度與GW4869處理濃度一一對(duì)應(yīng) |
| 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)： |
Animal Models: 完全缺失nSMase2活性的小鼠（遺傳背景：C57BL/6J小鼠） Dosages: 1.25 mg/kg Administration: i.p. |
| 參考文獻(xiàn)： |
1. Luberto C, et al. Inhibition of tumor necrosis factor-induced cell death in MCF7 by a novel inhibitor of neutral sphingomyelinase。 J Biol Chem. 2002, 277(43):41128-39. 2. Tabatadze N, et al. Inhibition of neutral sphingomyelinase-2 perturbs brain sphingolipid balance and spatial memory in mice. J Neurosci Res. 2010, 88(13):2940-51. 3. Dinkins MB, et al. Exosome reduction in vivo is associated with lower amyloid plaque load in the 5XFAD mouse model of Alzheimer's disease. Neurobiology of Aging. 2014, 35(8):1792-800. |
| 溶解性： |
soluble in DMSO |
| 保存條件： |
-20℃ |
| 配置溶液濃度參考： |
|
1mg |
5mg |
10mg |
| 1 mM |
1.732 ml |
8.658 ml |
17.316 ml |
| 5 mM |
0.346 ml |
1.732 ml |
3.463 ml |
| 10 mM |
0.173 ml |
0.866 ml |
1.732 ml |
| 50 mM |
0.035 ml |
0.173 ml |
0.346 ml |
|
| 注意： |
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